沉降系數是衡量大分子沉降速度的量度,沉降系數越大越容易沉降。大分子沉降速度的量度,等于每單位離心場的速度。或s=v/(ω2?r)。s是沉降系數,ω是離心轉子的角速度(弧度/秒),r是到旋轉中心的距離,v是沉降速度。沉降系數以每單位重力的沉降時間表示。
沉降系數通過分析離心機測定。
通常只需要幾十毫克甚至幾十微克樣品,配制成1~2毫升溶液,裝入分析池,以幾小時的分析離心,就可以獲得一系列的樣品離心沉降圖。根據沉降圖可以作樣品所含組分的定性分析,亦可以測定各組分的沉降系數和估計分子大小,作樣品純度檢定和不均一性測定,以組分的相對含量測定。
(1)樣品:蛋白質
(2)樣品溶液與離心:將樣品溶于緩沖液中,用一定規格的雙槽分析池,一邊加入溶液一邊加入溶劑。分析池與衡池衡重量,使衡池比分析池輕0.5g以內,然后分別裝入分析轉頭。抽真空。開Schlieren光光源,選擇工作速度,室溫離心。轉動腔達到真空后離心機開始運轉加速,此時在觀察窗口可以看到離心圖型。達到工作速度后恒速離心。
以蛋白質為例待看到樣品峰的尖端后即可以間隔照相。照完相即可關機,取出樣品液,清理轉頭和分析池。照相用強反差顯影沖洗后即得Schlieren光路沉降圖形照片。
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